Western及IP细胞裂解液


  • 商品名称: Western及IP细胞裂解液
  • 产品货号: 02.12268-100
  • 品牌: EallBio/亿奥邦
  • 储存条件: -20 ℃保存
  • 有效期: 1年

所属分类:

裂解液

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¥ 246

市场价

¥ 246

  • 产品规格
    • 100ml
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  • 产品描述
    • 商品名称: Western及IP细胞裂解液
    • 产品货号: 02.12268-100
    • 品牌: EallBio/亿奥邦
    • 储存条件: -20 ℃保存
    • 有效期: 1年

    产品简介:

    Western及IP细胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP),是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞,可以用于PAGE,Western blot,免疫沉淀(Immunol precipitation,IP)和免疫共沉淀(Co-IP)。本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品,也可以用于真菌或细菌样品。Western及IP细胞裂解液的主要成分为10 mM Tris (pH 7.5),100 mM NaCl,1%Triton X-100,以及1 mM EDTA,1 mM EGTA,10%甘油,0.1% SDS,0.5%去氧胆酸钠等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。

    用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用亿奥邦生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。本产品由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

    操作说明(仅供参考):

    一、对于培养细胞样品:

    1. 融解Western及IP细胞裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM,根据使用量,取每1 ml RIPA 加入10 μl PMSF,使 PMSF 的最终浓度为1 mM,混匀备用(PMSF现用现加),或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

    2. 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200 μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。植物细胞宜在冰上裂解2-10 min。

    对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200 μl裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必须分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。

    对于细菌或酵母:对于1 ml菌液或酵母液,离心去上清,使用PBS洗涤一次,充分去除液体后,轻轻弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入100-200 μl裂解液,轻轻弹击管底以混匀,冰上裂解2-10 min。如果希望获得更好的裂解效果,细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化,然后再使用本裂解液进行裂解。

    裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入100 μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150 μl或200 μl。

    3. 充分裂解后,10000-14000g 离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

    二、对于组织样品:

    1. 把组织剪切成细小的碎片。

    2. 融解Western及IP细胞裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM,根据使用量,取每1 ml RIPA 加入10 μl PMSF,使 PMSF 的最终浓度为1 mM,混匀备用(PMSF现用现加);或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

    3. 按照每20 mg组织加入100-200 μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)

    4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

    5. 充分裂解后,10000-14000 g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

    6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

    注意事项:

    1. 为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

    2. 本产品仅限专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

    3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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