中效RIPA裂解液(组织/细胞)


  • 商品名称: 中效RIPA裂解液(组织/细胞)
  • 产品货号: 02.12262-100
  • 品牌: EallBio/亿奥邦
  • 储存条件: 附件PMSF-20℃,-20℃。
  • 有效期: 1年

所属分类:

裂解液

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¥ 400

市场价

¥ 400

  • 产品规格
    • 100ml
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  • 产品描述
    • 商品名称: 中效RIPA裂解液(组织/细胞)
    • 产品货号: 02.12262-100
    • 品牌: EallBio/亿奥邦
    • 储存条件: 附件PMSF-20℃,-20℃。
    • 有效期: 1年

    产品简介:

    RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为高效、中效、弱效三类。RIPA裂解液(中效)的主要成分为50 mM Tris(pH7.4),150 mM NaCl,1% NP-40,0.5% sodium deoxycholate,0.1% SDS,以及sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用亿奥邦生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。本产品由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

    操作步骤:

    如发现 RIPA 有沉淀,请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。

    根据使用量,取每1 ml RIPA 加入10 μl PMSF,使 PMSF 的最终浓度为1 mM,混匀备用(PMSF现用现加)。

    1. 样品前处理

    a) 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。

    b) 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 μl裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。

    c) 对于组织样品:把组织剪切成细小的碎片。按照每20 mg组织加入150-250 μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

    2. 后处理

    将裂解后的样品10000-14000 g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。

    注意事项:

    裂解样品的所有步骤都需在冰上或4 ℃进行;RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子;本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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