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使用说明
1. 10% PAGE胶凝固剂配置方法,取0.1g PAGE胶凝固剂加入1ml蒸馏水,待其完全溶解,即为10% PAGE胶凝固剂。
2. 在6% SDS-PAGE分离胶预混液,按照1%的比例加入相应量的10%过硫酸铵或其替代物溶液,按照0.1%的比例加入相应量的TEMED。例如10ml 6% SDS-PAGE下层胶预混液中,加入100µl 10%过硫酸铵或其替代物溶液和10µl TEMED或其替代物溶液。适当混匀后倒入到制胶模具中,用异丙醇或蒸馏水封住液面,直至下层胶凝固充分。
3. 去除分离胶上面覆盖的液体,尽量去干净,然后倒入添加了10% PAGE胶凝固剂溶液和PAGE胶促凝剂的5% SDS-PAGE上层胶预混液,插入梳子,待上层胶凝固后,则表明制胶步骤结束,可以准备进行后续的电泳了。通常30-60分钟内胶会凝固。具体的凝固时间和温度及光照有关。(参考下表)
|
成分 |
配制不同体积分离胶预混液所需各成分的体积(ml) |
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6%SDS-PAGE分离胶预混液 |
5 |
10 |
15 |
20 |
30 |
50 |
|||
|
10%PAGE胶凝固剂 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
|||
|
PAGE胶促凝剂 |
0.005 |
0.01 |
0.015 |
0.02 |
0.03 |
0.05 |
|||
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成分 |
配制不同体积浓缩胶预混液所需各成分的体积(ml) |
||||||||
|
5%SDS-PAGE浓缩胶预混液 |
2 |
5 |
10 |
20 |
30 |
50 |
|||
|
10%PAGE胶凝固剂 |
0.02 |
0.05 |
0.1 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
|||
|
PAGE胶促凝剂 |
0.002 |
0.005 |
0.01 |
0.02 |
0.03 |
0.05 |
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注意事项
1. 在冬天室温较低时,可以自行再额外添加少量TEMED以促进凝胶凝固;也可将胶放37℃温箱凝固。
2. SDS-PAGE分离胶预混液中含有SDS,若低温放置出现沉淀,可使溶液恢复室温后,待沉淀溶解后再使用。
3. PAGE胶促凝剂和10%PAGE胶凝固剂最后加,在加入前需混匀前面所加试剂。10%PAGE胶凝固剂溶液在4℃有效期为一周;PAGE胶促凝剂易挥发,使用后请盖紧瓶盖。
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