细菌基因组DNA提取试剂盒 FlaPure Bacteria Genomic DNA Extraction Kit


适用于细菌基因组DNA的提取

  • 商品名称: 细菌基因组DNA提取试剂盒 FlaPure Bacteria Genomic DNA Extraction Kit
  • 产品货号: 04.10003
  • 品牌: EallBio/亿奥邦
  • 储存条件: 10~25℃
  • 有效期: 12个月

所属分类:

核酸提取/纯化系列

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¥ 648

市场价

¥ 648

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  • 产品描述
    • 商品名称: 细菌基因组DNA提取试剂盒 FlaPure Bacteria Genomic DNA Extraction Kit
    • 产品货号: 04.10003
    • 品牌: EallBio/亿奥邦
    • 储存条件: 10~25℃
    • 有效期: 12个月

    适用于细菌基因组DNA的提取

    产品简介

    本试剂盒可从各种细菌(革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌)中快速提取高质量的基因组DNA,每次可处理106~108个细胞。试剂盒采用优化的缓冲体系,使裂解液中的DNA高效特异地结合到硅基质吸附柱上。提取过程无需使用苯酚或氯仿等有毒试剂,得到的DNA 浓度和纯度高,可直接用于酶切、PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

    产品特点

    1. DNA质量高:提取的DNA浓度和纯度较高,适用于对浓度、纯度和完整性要求较高的下游实验;
    2. 安全低毒:无需酚、氯仿等有毒试剂。

    适用范围

    本品适用于细菌样本的基因组DNA提取。

    注意事项

    1. 第一次使用前,分别在Buffer GW1和Buffer GW2 中加入17 mL和60 mL的无水乙醇;
    2. 使用前请检查Buffer GB1和Buffer GB2 是否出现沉淀,如有请于56˚C水浴溶解后使用;
    3. 若下游实验受RNA影响较大,可按照操作说明在相应步骤加入RNase A(自备);
    4. 如果提取次生代谢产物大量积累或细胞壁厚的细菌培养物的基因组,建议在对数生长期早期收集样品。

    使用方法

    1. 取细菌培养物 1~5 mL(106~108个细胞,最多不超过 2×109个细胞,太多会导致吸附柱堵塞,降低浓度和纯度)置于离心管(自备)中,10,000 rpm(~11,500 x g)离心 1 min,尽量吸净上清;
    2. 向菌体沉淀中加入 200 μL Buffer GB1,振荡使菌体彻底重悬;

    注意:

    1. 对于难破壁的革兰氏阳性菌,可省去步骤2,加入180 μL溶菌酶溶液处理。(溶菌酶溶液配制:70 μL溶菌酶溶液(50 mg/ml,自备)+110 μL缓冲液(20 mM Tris  pH=8.02 mM Na2 -EDTA1.2 Triton X-100),37°C 孵育 30 min以上;
    2. 如需去除 RNA,可在上述步骤完成后,加入 4 μL 浓度为 100 mg/mL 的 RNase A 溶液(自备),振荡混匀15 s,室温放置 5 min。
    1. 加入 20 μL Proteinase K,混匀;
    2. 加入220 μL Buffer GB2,振荡15 s,70℃孵育10 min,溶液应变清亮,短暂离心以去除管盖内壁水珠;

    注意:加入Buffer GB2可能会产生白色沉淀,70℃孵育后一般会消失,不影响后续实验。若溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能会导致提取的DNA量少且不纯;

    1. 加入 200 μL 无水乙醇,涡旋震荡充分混匀;短暂离心去除管盖内壁的水珠;
    2. 将步骤 5 所得溶液(包括形成的沉淀)全部加入已装入收集管的吸附柱(FlaPure DNA Columns)中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12,000 rpm(~13,400 × g) 离心 30 s,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中;
    3. 向吸附柱中加入 500 μL Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm 离心30 s,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中;
    4. 向吸附柱中加入 600 μL Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm 离心30 s, 倒掉收集管中的废液;
    5. 重复步骤8;
    6. 将吸附柱重新放回收集管中,12,000 rpm 离心 2 min,倒掉收集管中废液。开盖于室温晾干数分钟;

    注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。

    1. 将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的膜中间部位悬空加入 50~200 μL Buffer TE 或灭菌水,室温放置 2~5 min,12,000 rpm 离心 2 min,收集 DNA 溶液,-20°C 保存 DNA。

    注意:

    1. 若需增加产量,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置 2~5 min  12,000 rpm 离心1 min;
    2. 如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有较大影响, 若用水作洗脱液应保证其pH值在7.0~8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围如需长期存,推荐用Buffer TE洗脱并于-20°C保存。

    常见问题与解决办法

    Q1:柱子堵塞?

    A1:

    1. 菌液用量过多或样品裂解不充分。建议按照说明书推荐量进行提取;
    2. 离心温度过低。本产品使用操作均在室温下进行。

    Q2:DNA 得率低?

    A2:

    1. 菌液用量过多或过少。建议按照说明书推荐量进行提取;
    2. 菌液不新鲜。建议提取新鲜或活力较高的菌液(如对数期细菌)。

    Q3:后期实验受RNA影响?

    A3:

    1. 未加入RNase A消化。若后续实验需要去除RNA影响,可按照说明书步骤加入RNase A消化;
    2. 样品中RNA含量过多。可适当增加 RNase A用量或延长消化时间。

    Q4结果显示蛋白残留较多

    A4

    菌液量过多。建议减少菌液量或重复步骤7一次即可。

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