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动物组织/细胞总RNA提取试剂盒（双柱型）FlaPure Animal Tissue Total RNA Extraction Kit
新型动物组织/细胞总RNA快速提取试剂盒，gDNA过滤柱一步去除基因组DNA污染，无需使用β-巯基乙醇
新型动物组织/细胞总RNA快速提取试剂盒，gDNA过滤柱一步去除基因组DNA污染，无需使用β-巯基乙醇
- 商品名称： 动物组织/细胞总RNA提取试剂盒（双柱型）FlaPure Animal Tissue Total RNA Extraction Kit
- 产品货号： 04.10007
- 品牌： EallBio/亿奥邦
- 储存条件： 10~25℃
- 有效期： 12个月
所属分类：
核酸提取/纯化系列
优品试剂
目录价：
¥ 1530
市场价
¥ 1530
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产品规格
- 50 次
库存剩余
1530
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- 产品描述
产品简介
本试剂盒可从≤20 mg动物软组织(肝脏、脾脏、肾脏，脑等) 中快速提取总RNA。试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用DTT及β-巯基乙醇，整个提取过程可在30 min内完成。试剂盒结合DNA过滤技术，可高效地过滤去除基因组DNA，提取的总RNA纯度高，无蛋白和其它杂质的污染，可用于RT-PCR、Northern Blot、Poly A纯化、RNase保护分析和体外翻译等实验。
产品特点
² 操作简便：30 min内完成数个样品的总RNA提取；
² 高效去除基因组DNA：独特的基因组DNA过滤柱，无需DNase处理；
² 安全低毒：无需DTT及β-巯基乙醇等有毒试剂；
² RNA纯度高：提取的RNA无杂质残留，适用于对纯度、完整性要求很高的下游实验。
适用范围
本品适用于动物软组织等样品的总RNA提取。
注意事项
1.第一次使用前应在漂洗液Buffer FRW1中加入48 mL的无水乙醇；
2.使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染，经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌、汗液及RNase等，可能导致RNA降解；
3.RNA在裂解液Buffer FRL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 min，然后用水彻底清洗、灭菌；
4.配制溶液应使用RNase-Free ddH2O（将水加入干净的玻璃瓶中，加DEPC至终浓度为0.1%(V/V)，混匀放置过夜后高压灭菌）。
使用方法
1.每10~20 mg组织加350 µL Buffer FRL，用电动匀浆器将组织彻底匀浆, 然后加入10 µL Proteinase K，混匀后室温放置5 min；
注意：脾脏组织建议使用5 mg，肌肉类的组织可以增加到50~100 mg。
2.12,000 rpm (~13,400×g) 离心2~5 min，取上清；
3.把RNase-Free FlaPure gDNA Remove Column放在2 mL收集管中，把细胞裂解液或组织上清液转移至gDNA过滤柱中，12,000 rpm (~13,400×g) 离心30 s，保留滤液；
注意：组织裂解液需高速离心去除杂质，细胞碎片会引起柱子的堵塞。处理某些样品时，离心后裂解液表面还可能会有一层脂类层，转移上清液尽量不要吸到这些物质。若gDNA过滤柱堵塞，可将滤液吸出加入适量裂解液匀浆后再转移至新的gDNA过滤柱中。
4.丢弃gDNA过滤柱，滤液中加入等倍体积70%乙醇，用移液枪吸打3~5次；
5.把RNase-Free FlaPure RNA Column放在2 mL收集管中，将溶液和沉淀一起转移至吸附柱中。12,000 rpm (~13,400×g) 离心30 s，倒掉收集管中的废液，把吸附柱放回收集管中；
6.如不进行DNase I消化，加入700 µL Buffer FRW至吸附柱上，12,000 rpm (~13,400×g) 离心30 s，倒掉收集管中的废液，把吸附柱放回收集管中；
7.（可选）若后续实验对RNA纯度比较严格，可选择使用DNase I（需另外订购）进行膜上DNase消化；
1)向RNase-Free吸附柱中加入350 μL Buffer FRW，12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s，弃废液，将吸附柱放回收集管中；
2)向吸附柱中央加入DNase I 工作液，室温放置15 min；
3)向RNase-Free吸附柱中加入350 μL Buffer FRW，12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s，弃废液，将吸附柱放回收集管中；
8.加入500 µL Buffer FRW1（使用前请先检查是否加入乙醇）至吸附柱中，室温静置2 min，12,000 rpm (~13,400×g) 离心30 s，倒掉废液，把吸附柱放回收集管中；
9.重复步骤8；
10.12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min，倒掉废液，将吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残留的漂洗液；
注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液的残留，可能会影响后续的RT等实验。
11.将吸附柱转移至新的RNase-Free离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加30~100 μL RNase-Free ddH2O，室温静置2 min，12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min，得到RNA溶液，将洗脱的RNA溶液置于-80℃保存。
注意：洗脱缓冲液体积不应少于30 μL，体积过小影响回收效率。
常见问题与解决办法
Q1：柱子出现堵塞？
A1：
1) 样品过量。裂解液粘稠，减少样品量或加大裂解液用量，样品量过多反而会降低产量和纯度；
2) 裂解液离心不充分。组织裂解液需高速离心去除杂质，杂质会引起柱子的堵塞，转移上清液尽量不要吸到杂质；
3) 离心温度过低。本产品使用操作均在室温下进行。
Q2：RNA提取过程中gDNA过滤柱堵塞？
A2：
1) 增加离心次数、时间或转数；
2) 可将滤液吸出加入适量裂解液匀浆后再转移至新的gDNA过滤柱中。
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