DNA凝胶回收试剂盒


一盒两用,可有效回收80 bp~10 kb 双链DNA片段,也可直接回收PCR原液,凝胶无需称重,操作简便,回收率高达85%

  • 商品名称: DNA凝胶回收试剂盒
  • 产品货号: 04.10009-200
  • 品牌: EallBio/亿奥邦
  • 储存条件: 10~25℃
  • 有效期: 12个月

所属分类:

核酸提取/纯化系列

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¥ 650

市场价

¥ 650

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  • 产品描述
    • 商品名称: DNA凝胶回收试剂盒
    • 产品货号: 04.10009-200
    • 品牌: EallBio/亿奥邦
    • 储存条件: 10~25℃
    • 有效期: 12个月

    一盒两用,可有效回收80 bp~10 kb 双链DNA片段,也可直接回收PCR原液,凝胶无需称重,操作简便,回收率高达85%

    产品简介 

    本试剂盒适用于从琼脂糖凝胶中回收多至10 μg DNA(80 bp~10 kb),回收率可达65~85%。琼脂糖凝胶在高离序盐中(Buffer GN)溶解后,DNA片段选择性吸附于离心柱内的硅基质膜上。回收后的DNA纯度高,并能保持片段完整性和高生物学活性,可直接用于测序、连接、PCR扩增、体外转录等分子生物学实验。

    产品特点

    • 快速:胶块无需称重,操作简便;
    • 高效:回收效率高,获得的目的DNA纯度高;
    • 适用性广:一盒两用,可用于DNA片段凝胶回收及PCR产物直接回收等。

    适用范围

    本品适用于PCR产物直接回收、DNA片段的凝胶回收、酶切产物的凝胶回收等。

    注意事项

    1. Buffer W1使用前加入指定量的无水乙醇,各溶液使用后请及时将盖子拧紧;
    2. 若回收凝胶中的DNA片段,电泳时应使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果;
    3. 建议使用高质量的琼脂糖,以免其中杂质影响下游连接等实验;
    4. Buffer GN中含刺激性溶液,操作时要戴乳胶手套和眼镜;
    5. 回收产物可通过琼脂糖电泳或分光光度计检测是否回收成功。使用分光光度计时,若使用Elution Buffer进行洗脱,建议使用Elution Buffer进行校准。

    使用方法

    • PCR产物直接回收
    1. 按照PCR原液:Buffer GN=1:3的比例加入Buffer GN(不少于150 μL)后吸打混匀(如:在1.5 mL离心管中,50 μL PCR原液加入150 μL Buffer GN后吹打混匀);

    直接进入步骤5。

    • 从琼脂糖凝胶中回收
    1. 在365 nm长波紫外灯下,用干净刀片将目的条带切下,尽量切除不含目的DNA条带,得到凝胶体积越小越好(切胶时,为避免紫外照射时间过长对DNA造成损伤,建议快速切胶);
    2. 将含有目的DNA条带的凝胶放入2 mL离心管中,加入500 μL的Buffer GN(若胶块过大,适当添加Buffer GN至溶液呈淡黄色);
    3. 65℃水浴4~6 min,每2~3 min上下颠倒混匀一次至凝胶完全融化,溶液呈淡黄色;
    4. 将溶液转入吸附柱EC中,12,000 ×g离心1 min,弃废液,将吸附柱EC放回空收集管;
    5. 在吸附柱EC中加入600 μL Buffer W1(请先检查是否已加入指定体积的无水乙醇),12,000 ×g离心1 min,弃废液;

    注意:如果回收的DNA是用于克隆实验或直接测序等,建议Buffer W1加入后静置2~5 min再离心。

    1. 重复步骤5一次;
    2. 将吸附柱EC放回空收集管中,12,000 ×g离心2 min;
    3. 取出吸附柱,置于干净的1.5 mL离心管中,20~25℃开盖静置2 min,在吸附膜的中间部位加35~50 μL Elution Buffer(60~65℃预热Elution Buffer效果更好),20~25℃放置2 min,12,000 ×g离心2 min。如需较多量DNA,可将得到的溶液重新转入吸附柱中,离心2 min。

    注意:洗脱体积越大,洗脱得率越高。若需得到较高浓度的DNA,可以适当减少洗脱体积,但最小体积应不少于25 μL,体积过小会降低DNA洗脱得率,降低产量。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序,需使用ddH2O洗脱,保证pH值在7.0~8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20°C以防DNA降解。

    常见问题与解决办法

    Q1:DNA回收率低 ?

    A1:

    1. 琼脂糖凝胶未完全溶化。尽可能切除不含目的片段的琼脂糖,溶胶时多次上下颠倒使凝胶充分溶化,确保无固体琼脂糖残留;
    2. 试剂准备有误。Buffer W1需按照瓶身标示加入指定体积的无水乙醇;
    3. 洗脱效率低。将Elution Buffer预热至60~65℃,并进行二次洗脱。

    Q2:纯化后的DNA下游结果不理想?

    A2:

    1. 盐离子残留。确保用Buffer W1洗脱两次,此外沿吸附柱管壁四周加入Buffer W1,或加入Buffer W1后颠倒混匀2 ~3次有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐离子;
    2. 琼脂糖残留。尽可能切除不含目的片段的琼脂糖,多次上下颠倒使凝胶充分溶化,确保无固体琼脂糖残留。

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