1.1×S4 Fidelity PCR Mix


1.1×即用型PCR预混液,保真度为Taq的30倍,极速延伸(10~15 s/kb),含有绿色电泳指示剂

  • 商品名称: 1.1×S4 Fidelity PCR Mix
  • 产品货号: 04.11000
  • 品牌: EallBio/亿奥邦
  • 储存条件: -20℃
  • 有效期: 24个月

所属分类:

PCR系列

目录价:

¥ 473

市场价

¥ 473

  • 产品规格
    • 5×1.125 mL
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-
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  • 产品描述
    • 商品名称: 1.1×S4 Fidelity PCR Mix
    • 产品货号: 04.11000
    • 品牌: EallBio/亿奥邦
    • 储存条件: -20℃
    • 有效期: 24个月

    1.1×即用型PCR预混液,保真度为Taq的30倍,极速延伸(10~15 s/kb),含有绿色电泳指示剂

    产品简介

    本产品为1.1×即用型快速PCR预混液,内含S4 Fidelity DNA polymerase、dNTPs以及优化的缓冲体系,只需添加引物和模板即可进行扩增,可有效扩增5 kb以内的DNA片段。体系中包含电泳指示剂,可在扩增完成后直接上样进行电泳检测。

    该酶具有5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性,扩增产物为平末端,可直接用于平末端克隆。

    产品特点

    • 操作简单:1.1×即用型预混液,无需添加ddH2O,最大程度地减少实验步骤;
    • 高保真:保真度为野生型Taq酶的30倍;
    • 极快的延伸速度:10~15 s/kb;
    • 超高的耐热性能:98℃热处理1 h后聚合酶活性无明显变化。

    适用范围

    本产品适用于以试剂盒提取的基因组DNA、cDNA和质粒DNA的PCR扩增,如基因鉴定、基因克隆等实验。

    注意事项

    1.本产品为1.1×PCR预混液,无需额外添加ddH2O。每次反应中该产品用量至少应占到总反应体积的85%,50 μL体系至少使用43 μL PCR Mix,25 μL至少使用21 μL PCR Mix;

    2.请使用高质量的模板进行扩增,如试剂盒提取的基因组DNA。请勿使用dUTP或含尿嘧啶的引物与模板;

    3.PCR Mix应避免反复冻融,短期内多次使用可置于4℃保存。

    使用方法

    操作示例

    按下表配制PCR反应体系(冰上操作)

    组分

    25 μL体系

    50 μL体系

    终浓度

    1.1×S4 Fidelity PCR Mixa

    21~22 μL

    43~45 μL

    Primer 1 (10 μM)b

    1.0 μL

    2.0 μL

    0.4 μM

    Primer 2 (10 μM)b

    1.0 μL

    2.0 μL

    0.4 μM

    Template DNAc

    1~2 μL

    1~3 μL

     

    1.当需要加入较多的模板时,可相应调整本产品用量,但本产品占比不可低于总体系的85%,Mix含量过低会降低扩增效率。本产品推荐45 μL/50 μL扩增体系;

    2.引物终浓度范围为0.2~0.8 μM,推荐0.4 μM,过少的引物会导致扩增失败或产量极低,过量的引物会增加错配的可能性,导致非特异性扩增;

    3.模板推荐量:

    试剂盒提取的基因组DNA:50~500 ng;

    质粒、噬菌体DNA:0.05~1 ng;

    cDNA:推荐将反转录产物原液稀释5~10倍后,取1~2 μL作为模板。

    (注:过量的模板会导致非特异性扩增,过少的模板易导致PCR扩增效率低。)

    建议的PCR条件

    步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性a

    98℃

    2 min

    1

    变性

    98℃

    10 s

     

    30~35 cyclesf

    退火

    Tmb

    10~15 sc

    延伸

    72℃d

    10~15 s/kbe

    终延伸

    72℃

    1~5 min

    1

    -

    4℃

    Hold

    -

    1.预变性:扩增较长的片段时,建议使用95℃ 5 min预变性处理防止对DNA造成额外的损伤;

    2.退火温度:参考引物Tm值,最适退火温度与引物间的平均Tm值相近,若引物间Tm值偏差较大,建议退火温度设置为引物中Tm较小值+1~2℃;

    (值得注意得是,若引物上添加有与模板不匹配的碱基序列,如酶切位点、同源臂等,PCR程序设置退火温度时,仅需计算与模板特异性匹配的引物序列的Tm值。)

    3.退火时间:对于含兼并引物、复杂模板的扩增,建议退火时间延长至30 s;

    4.延伸温度:通常为72℃,可根据实际需求在68~75℃范围内调整;

    5.延伸时间:常规模板推荐设置为10~15 s/kb,复杂模板可以将延伸速度增加至20~30 s/kb;略微增加延伸时间有利于提高长片段、低浓度、复杂模板的PCR产量,但总延伸速度不超过30 s/kb;

    6.循环数:30个循环可满足大部分扩增需要,循环数过多易导致非特异性扩增,若扩增条带较弱,可将循环数增加至35~40个。

    常见问题与解决办法

    Q1:扩增无产物或产物量少?

    A1:

    1.模板降解或模板纯度差。电泳检测模板质量,使用高质量模板;

    2.模板浓度过低。适当增加模板用量;

    3.引物不合适。优化引物设计;

    4.退火温度不合适。设置退火温度梯度,摸索合适的退火温度;

    5.循环数过少。适当增加5~10个循环;

    6.延伸时间不足。复杂模板可适当增加延伸速度至20~30 s/kb。

    Q2:扩增出现非特异条带或弥散带?

    A2:

    1.引物特异性差。优化引物,避免非特异性条带以及引物二聚体的扩增;

    2.引物浓度过高。降低引物浓度;

    3.模板过量或纯度差。减少模板量,使用高质量模板;

    4.退火温度过低。适当提高退火温度或使用Touchdown PCR程序;

    5.循环数过多。减少循环数至25~30 cycles。

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