DPPH 自由基清除能力检测试剂盒(可见分光光度法)


  • 商品名称: DPPH 自由基清除能力检测试剂盒(可见分光光度法)
  • 产品货号: 02.13066-50
  • 品牌: EallBio/亿奥邦
  • 储存条件: 2-8℃
  • 有效期: 1年

所属分类:

抗氧化系列

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¥ 580

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  • 产品描述
    • 商品名称: DPPH 自由基清除能力检测试剂盒(可见分光光度法)
    • 产品货号: 02.13066-50
    • 品牌: EallBio/亿奥邦
    • 储存条件: 2-8℃
    • 有效期: 1年

    产品简介:

    近年来的研究发现,人体内的抗氧化能力的降低与各种疾病的产生息息相关,因此人们对于具有抗氧化能力的功能食品的需求越来越高。根据 Shimamura 等人的文献报道,使用稳定的自由基DPPH (2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl)作为底物的抗氧化能力检测法是数据重现性最好的一种方法。本试剂盒以抗氧化物维生素C为基准,对样品的抗氧化能力进行检测。使用本试剂盒,只需要将内含的 DPPH用无水乙醇溶解即可进行实验,无需繁冗的称量操作和吸光度的调整。

    图1.DPPH Antioxidant AssayKit 的检测原理

    使用说明(仅供参考):

    一、样本的制备(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

    1.植物样本的制备: 将新鲜样本置于60℃烘箱烘干至恒重,研钵研碎(或粉碎机粉碎),过30~50目筛。称取约0.05 g样本,按实验需求进行提取。提取液室温10000rpm离心10min,取上清,置冰上待测。
    2.红酒、果汁等液体样本: 首先应对样本中待测物质进行提取,提取液室温10000rpm离心10 min

    3.取上清,置冰上待测。3.提取物或者药物:配制成一定浓度,如5mg/ml。

    注意:不同样本清除DPPH自由基的能力可能相差很大,为保证实验结果的准确性,样本要根据预实验结果进行适当调整(如清除率大于90%,建议将提取的样本进行稀释:清除率小于5%,建议加大烘干样本质量或液体样本体积进行提取)。

    二、DPPH工作液的制备

    在EP管中将试剂一溶于30ml试剂二(超声溶解),用试剂二少量多次洗涤EP管至管中无残留,将洗涤液转移至上述溶液中,最终加试剂二至总体积为100m,制备成DPPH工作液,摇匀避光备用,用不完的工作液可于2-8°C保存一周。

    三、标准品的准备:

    用蒸馏水将标准品溶液稀释成0.3、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625 mg/ml浓度的标准品溶液,用于标准曲线测定。每次测定新鲜配制系列标准品稀释液。

    四、样本测定:

    1.标准曲线绘制:在1.5 m的EP管中加25 m系列浓度标准品溶液,975 WDPPH工作液,混匀。

    2.避光反应30 min,利用分光光度计,调节波长至515nm,无水乙醇调零,利用标准品浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标制作标准曲线,并获得横纵坐标之间的函数关系式,然后利用各样品的吸光度值计算样品的总抗氧化能力。

    3.样品检测:初次检测的样品,请按照下面的步骤进行预实验,摸索最佳浓度范围。确定最佳浓度范围的方法:

    a.将样品溶液进行多次10倍稀释,准备至少4种不同浓度梯度的样品。

    b.吸取稀释好的样品溶液25 ml加至EP管中。

    c.各孔中加入975 uDPPH工作液,吹打混匀。

    d.空白孔中加入25 u不加样品的稀释溶液,975 μDPPH工作液,吹打混匀。

    e.将孔板放置在25℃℃,避光静置30 min。

    f.用分光光度计检测,调节波长至515nm。

    4.确定最佳浓度范围后按照下表进行检测实验

    试剂名称μl 空白管 测定管 对照管 阳性对照管
    样品 - 25 μl 25 μl -
    DPPH工作液 975μl 975μl - 975μl
    样品提取稀释液(自备) 25 μl - 975μl  
    标准品 - - - 25 μl

    混匀,室温避光静置30min,于515 nm处测定吸光度。分别记为A空白、A测定、A对照、A阳性对照。每个测定管需设一个对照管。阳性对照标准曲线和空白管只需测1-2次。

    五、计算公式;

    1.阳性对照的自由基清除率计算公式:

                                                      DPPH自由基清除率Dvc%=[(A空白-A阳性对照)-A空白]x100%

    2.样本的自由基清除率计算公式:

                                                      DPPH自由基清除率%=[[A空白-(A测定-A对照)]-A空白]x100%

    附录:标准曲线如下图所示:

    标准品浓度(mg/ml) 0.3 0.25 0.125 0.0625 0.03125 0.015625
    吸光度(n-3) 0.944 1.098 1.388 1.522 1.583 1.616

    Tips:若首次实验线性关系未满足实验要求,可进行多点实验,多设置几个复孔。

    注意事项:

    1.不同样本清除DPPH自由基的能力可能相差很大,如果要比较不同样本的DPPH自由基清除能力,建议对于同一批样本加入等量的样本,红酒、组织匀浆、果汁等液体样本加入同样体积,提取物(或者药物)配制成同样浓度。在比较时,将样本根据预实验结果进行适当调整,比较同样浓度(相同稀释倍数)的清除率大小。

    2.样本建议当天提取当天检测。

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