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产品简介：
间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）是中胚层来源的多能干细胞，具有高度自我更新能力和多项分化潜能，体外在一定的条件下可以被诱导分化成脂肪细胞、成脂细胞、成软骨细胞。2006年国际细胞治疗协会（ISCT）将此三项检测指标确定为MSC鉴定的必检项目，以MSC为基础的研究报道均会对此三项指标进行鉴定。
在成脂分化作用下，MSC会先后诱导分化为前成脂细胞（preadipocytes）)和脂肪细胞（adipocytes），后者聚集着大大小小的脂肪滴（lipid droplets）。油红O在脂肪中的溶解度大于其在染液中的溶解度，因而使脂肪着色，呈现红色或橘红色。被染色的脂肪滴数量和深度会受到多种因素的影响，例如细胞类型、细胞代数、分化时间和培养条件等。
小鼠间充质干细胞成脂诱导分化与染色试剂盒包括成脂诱导培养体系所有成分以及鉴定所用的油红O染色液。本产品可用于大鼠骨髓、脂肪、牙髓等组织来源的间充质干细胞的成脂诱导分化与染色。
特点优势：诱导分化程序简单便捷；成脂诱导效率高
质量控制：
本产品已经过无菌检测、pH测试、渗透压检测、内毒素检测。
声明：本产品供科学研究和生产使用，用于组织和细胞的体外培养；禁止临床使用。
完全培养基A液的配制方法
1.配制前将特级胎牛血清及成脂诱导添加物放置于4 ℃冰箱内完全融化。IBMX放置室温中解冻。
注意:融化后的血清中可能出现絮状物，其主要成分为析出的血纤蛋白，这不会影响产品使用效果；如絮状物较多，可离心去除（不建议过滤，过滤会造成部分营养物质丢失）。
2.用75%医用酒精擦拭消毒试剂盒中各瓶/管表面。
3.将血清、成脂诱导添加物和IBMX全部加入DMEM低糖培养基中（DMEM需先37 ℃水浴锅预热，否则IBMX会预冷析出）。
4.轻轻颠倒摇晃配制好的成脂诱导分化完全培养基，使其混合均匀。
特别建议：如短时间内无法使用完全部的培养基，建议按照上述配方比例分批配制；剩余成分可以分装为合格规格，按各自保存条件储存，切勿反复冻融。
完全培养基B液的配制方法
1.配制前将特级胎牛血清及Insulin放置于4 ℃冰箱内完全融化。
2.用75%医用酒精擦拭消毒试剂盒中各瓶/管表面。
3.将血清和Insulin全部加入DMEM低糖培养基中。
4.轻轻颠倒摇晃配制好的成脂诱导分化完全培养基，使其混合均匀。
明胶包被培养器皿表面
1.为了避免诱导过程中细胞漂浮，建议对成脂诱导使用的培养器皿表面进行明胶包被。
2.取能覆盖整个培养皿/板底面量的0.1%明胶入到培养皿/板中，如6孔板中加2 ml/孔。
3.摇匀液体使其覆盖整个培养皿/板的底面。
4.将铺有0.1%明胶的培养皿/板室温放置（生物安全柜或超净工作台中）至少30 min以上。
5.吸弃明胶，待培养皿/板晾干后，1×PBS洗2次，即可用于接种细胞。
注意: 包被明胶的培养皿/板在无菌和明胶不蒸干的条件下，可以在4 ℃保存两周。
成脂诱导分化操作规程（以6孔板为例）
1.当MSC融合度达到80-90%时，消化细胞并计数；
2.将细胞按照1×105 cells/ml的密度接种在包被0.1%明胶的六孔板中，每孔加入2 ml正常培养用完全培养基。
3.将细胞置于37 ℃，5% CO2的培养箱中进行培养。
4.当细胞汇合度达到100%时，吸弃上清，PBS洗2 次，每孔加入2 ml人间充质干细胞成脂诱导分化完全培养基A液；
5.诱导培养3天后，吸去六孔板中的A液，加入2 ml人间充质干细胞成脂诱导分化培养基B液；
6.诱导培养1天后，吸去B液，换回A液继续诱导。
7.重复以上A液和B液“3+1”交替程序3-5次后（12-20天），继续用B液维持培养4-7天直到脂滴变得足够大、圆。B液维持培养期间，每隔2-3天需要换用新鲜的B液
油红O染色（以6孔板为例）
1.诱导成脂分化结束后，吸弃上清，PBS 清洗1-2遍，每孔加入2 ml 4%多聚甲醛溶液，固定30 min；
2.油红O染色工作液配制方法：饱和油红O染液：蒸馏水=3:2，混匀后用中性滤纸过滤即可（或者混匀后1100 rpm离心4 min，使用上清）。
3.将4%多聚甲醛吸净，PBS清洗2遍。每孔中加入1 ml油红O染液，室温染色30 min；
4.吸净油红O染液，PBS清洗2-3遍。
5.每孔加入1 ml PBS，倒置显微镜下观察成脂染色效果。
图1 图2
图1：小鼠骨髓间充质干细胞成脂诱导分化油红O染色效果
图2：小鼠脂肪间充质干细胞成脂诱导分化油红O染色效果
注意事项
1.本产品所有组分均为无菌包装，在使用过程中请注意无菌操作，避免微生物污染；若配制过程有污染风险，可将完全培养基过滤除菌。
2.产品发货时使用冰袋运输，若收到货后暂时不使用，请按照保存条件将各组分保存。
3.为了您的安全和健康，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
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