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产品简介：
破骨细胞（Osteoclast，OC）是骨吸收的主要功能细胞，在骨发育、生长、修复、重建中具有重要的作用。破骨细胞起源于血系单核－巨噬细胞系统，是一种特殊的终末分化细胞，它可由其单核前体细胞通过多种方式融合形成巨大的多核细胞。破骨细胞活性一旦异常，就会导致平衡被打破，从而引发骨硬化和骨质疏松等代谢性骨疾病。因此，破骨细胞的体外培养与研究对于临床疾病的研究非常重要。
抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase，TRAP）是破骨细胞的标志性酶，特异性分布于破骨细胞中。TRAP染色试剂盒即是用于显示组织中的破骨细胞。其中基本原理在于，在含酒石酸的酸性条件下，抗酒石酸酸性磷酸酶TRAP能将萘酚AS-BI磷酸盐水解，产生的萘酚AS-BI与六偶氮副品红结合，形成非水溶性的酒红色物质沉积在酶活性原位，从而实现对抗酒石酸酸性磷酸酶的显色和定位。
特点优势：诱导分化程序简单便捷；成破骨诱导效率高
质量控制：
本产品已经过无菌检测、pH测试、渗透压检测、内毒素检测。
声明：本产品供科学研究和生产使用，用于组织和细胞的体外培养；禁止临床使用。
成破骨诱导分化完全培养基液的配制方法：
1.配制前将成破骨诱导添加物A和成破骨诱导添加物B放置于4 ℃冰箱内完全融化。
2.用75%医用酒精擦拭消毒试剂盒中各瓶/管表面。
3.将成破骨诱导添加物A和成破骨诱导添加物B全部加入RAW264.7完全培养基中。
4.轻轻颠倒摇晃配制好的成破骨诱导分化完全培养基，使其混合均匀。
特别建议：如短时间内无法使用完全部的培养基，建议按照上述配方比例分批配制；剩余成分可以分装为合格规格，按各自保存条件储存，切勿反复冻融。
成破骨诱导分化操作规程（以12孔板为例）
1.当RAW264.7细胞融合度达到80-90%时，用细胞刮刀收集细胞并计数；
2.使用37 ℃预热的破骨诱导分化培养基重悬细胞，按照5000~20000 cells/cm2密度进行铺板，每孔加入1 ml破骨诱导完全培养基。
3.将细胞置于37 ℃，5% CO2的培养箱中进行培养。
4.诱导培养过程中，每隔1天，吸去孔板中的诱导液，加入预热好的新鲜的成破骨诱导完全培养基；
5.诱导分化4-10天，可观察到成熟的多核破骨细胞。
6.诱导完成后即可进行染色或者下一步实验。
TRAP染色：
配制TRAP工作液
1.取50 μl副品红溶液与50 μl亚硝酸钠溶液在洁净离心管中混匀，得到六偶氮副品红溶液；
2.向第1步的100 μl六偶氮副品红溶液中加入100 μlAS-BI磷酸盐底物溶液，吹吸数次充分混匀；
3.吸取1.8 ml反应缓冲液加入到第2步的混合液中充分混匀；
4.第3步的混合液经针式滤器过滤（0.45 μm水系滤膜）即得到TRAP工作液。
注意：务必按照所属顺序配制工作液。每个组织点大约需要200-300 μl工作液，根据使用量配制，现配现用，避免浪费。
染色操作
1.细胞固定：吸除成破骨诱导培养基，加入4%多聚甲醛室温固定15~30 min，蒸馏水洗3次。
2.细胞破膜：（不做细胞核染色，可不做此步骤）以0.2% Triton X-100溶液覆盖细胞进行破膜处理20~30 min，蒸馏水轻洗3遍。
3.孵育染色：将TRAP工作液加到细胞孔板内覆盖细胞，37 ℃避光孵育1~2 h，蒸馏水洗3次。
4.细胞核复染（可选，自备相关试剂）：吸除孵育液并水洗，以苏木素染液进行染核。
5.显微镜下观察，拍照。
RAW264.7成破骨诱导6 d染色效果
注意事项
1.本产品所有组分均为无菌包装，在使用过程中请注意无菌操作，避免微生物污染；若配制过程有污染风险，可将完全培养基过滤除菌。
2.本产品发货时使用冰袋运输，若收到货后暂时不使用，请按照保存条件将各组分保存。
3.为了您的安全和健康，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
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