血液低密度脂蛋白/极低密度值脂蛋白-胆固醇(LDL/VLDL-C)酶法测定试剂盒


  • 商品名称: 血液低密度脂蛋白/极低密度值脂蛋白-胆固醇(LDL/VLDL-C)酶法测定试剂盒
  • 产品货号: 02.12945-100
  • 品牌: EallBio/亿奥邦
  • 储存条件: 2-8℃
  • 有效期: 6个月

所属分类:

胆固醇测定系列

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  • 产品描述
    • 商品名称: 血液低密度脂蛋白/极低密度值脂蛋白-胆固醇(LDL/VLDL-C)酶法测定试剂盒
    • 产品货号: 02.12945-100
    • 品牌: EallBio/亿奥邦
    • 储存条件: 2-8℃
    • 有效期: 6个月

    产品简介

    血浆中的脂质以脂蛋白-胆固醇-甘油三酯复合物形式存在。由肝脏生成的极低密度脂蛋白复合物(VLDL),因富含甘油三酯而密度很低;随着其甘油三酯逐渐水解利用,VLDL变成IDL复合物并失去Apo E和Apo C2,转变成为富含Apo B100和胆固醇的LDL复合物。血低密度脂蛋白LDL携带大量胆固醇,与动脉粥样硬化形成正相关,是导致动脉粥样硬化的危险因素。临床常规血脂检验包括四项:总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白-胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)和高密度脂蛋白-胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)、甘油三酯(triglyceride,TG)。血浆总胆固醇包括2/3的胆固醇酯和1/3的游离胆固醇。LDL/VLDL-C的测定需要预先分离不同密度的脂蛋白复合物,再测定其中的胆固醇含量。

    检测原理:

    试剂盒采用世界卫生组织(WHO)、美国FDA、中国《全国临床检验操作规程》推荐的LDL分离方法和胆固醇测定方法,操作简便可靠,灵敏度高,检测范围20~5000 µmol/L,重复性极佳。采用CHOD-PAP终点法结合经典GPO Trinder酶学反应:(1)胆固醇酯酶分解胆固醇酯为游离胆固醇。(2)胆固醇氧化酶将游离胆固醇氧化。(3)反应过程产生过氧化氢。(4)在过氧化物酶催化下生色底物转化为苯醌亚胺,光密度值与胆固醇浓度成正比。

    所需设备:酶标仪,最佳工作波长540 nm,如无此波长建议优先选用570、530、490 nm。

    样品准备:

    人和动物的自然凝固后血清、EDTA抗凝血浆。不建议使用肝素抗凝。新鲜血液4 ºC 2000 g离心5 min得到血浆,非抗凝血4 ºC放置2 h得到血清。可4 ºC存放数天或-20 ºC半年。可4 ºC存放数天或-20 ºC半年。如超过线性范围用生理盐水1:1~1:5稀释后测定。

    标准品稀释:

    5 mM胆固醇标准品用无水乙醇倍比稀释为2500、1250、625、312.5、156、78、36 µmol/L。通常设置稀释4个点/管即可,注意设置0浓度对照反应管。立即使用,用毕弃去。

    1. LDL/VLDL -胆固醇分离步骤:

    1.1. 取50 μl血清或血浆(样品体积范围20-100 μl)。

    1.2. 加等体积50 μl的LDL/VLDL捕获剂,振荡混匀。

    1.3. 室温孵育10 min。沉淀10-30 min、室温或4 ℃不影响结果,但条件要一致。

    1.4. 2000 g离心20 min。离心温度4~22度均可,不同样品离心条件要一致。

    1.5. 沉淀含有LDL/VLDL-胆固醇。小心吸除上清,再次2000 g离心10 min,弃尽上清。

    1.6. 加入100 μl PBS或生理盐水(初始血浆样品的2倍体积),振荡重悬沉淀。

    2. LDL/VLDL-胆固醇测定步骤:

    2.1. 配制测定工作液:按4:1比例,取4 ml试剂R1与1 ml试剂R2混合,立即使用。4 ºC保存<1天,变色弃去。

    2.2. 取190 μl测定工作溶液,加入微板孔内。

    2.3. 加入步骤“1.6”制备的上清液10 μl。上清液体含HDL-胆固醇,放置后如有絮状物应再次离心。标准品管的加样量也是10 μl标准品。反应总体积200 μl。

    2.4. 37 ℃ 20 min(15~30 min)。或25 ºC室温反应30 min但灵敏度略低。反应平衡后颜色在60 min内稳定。

    2.5. 先用蒸馏水空白管调零。然后测定各管OD540值。绘制标准曲线并计算总胆固醇浓度。Excel作图步骤参考:各标准管OD值为y轴,标准品浓度为x轴。(1)鼠标左键圈住数据,点击做图向导,选择散点图,点击完成。(2)鼠标右键点图上的某一点,点击添加趋势线,点击选项,点击显示公式和R2值。

    产品说明:

    1. 可微量调整样品与工作液体积比例。

    2. 正常人血中总胆固醇参考值2.86~5.98 mmol/L或110~230 mg/dL。

    3. 维生素C>0.18 g/L、血红蛋白>2 g/L、胆红素>0.25 g/L、强还原剂二硫苏糖醇、巯基乙醇等干扰测试。

    4. 2~8 ℃保存,6个月有效。

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