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一、细胞介绍
该细胞源自于一位58岁白人男性,由D·J·Griad通过肺癌组织移植培养建系；A549能通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。
A549-GFP细胞，是在A549细胞的基础上，通过慢病毒感染的方式携带GFP基因，构建的绿色荧光示踪细胞。
二、细胞培养条件及特性
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细胞英文名称 |
A549-GFP |
细胞中文名称 |
人肺癌细胞绿色荧光标记 |
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来源 |
肺癌 |
含量 |
>1x106 细胞数 |
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形态特性 |
上皮细胞样 |
生长特性 |
贴壁生长 |
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规格 |
T25瓶或者1mL冻存管包装 |
冻存条件 |
无蛋白细胞冻存液2.0 |
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培养体系 |
Ham’s F-12K+10%FBS+1%P/S |
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传代方法 |
首次1:2;1:2-1:3 |
消化时间 |
2-3 min |
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备注 |
仅供科研使用 |
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三、细胞筛选
该细胞为稳定转染GFP的细胞，随细胞传代次数的增加，其GFP荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。
建议收到细胞后至少传3代，冻存留种后再进行筛选。
初次进行细胞筛选时，建议加入终浓度为1μg/ml嘌呤霉素的完全培养基维持培养，若无细胞漂浮或者漂浮较少，即可更换为含2μg/ml嘌呤霉素的完全培养基继续筛选，以此类推，至最高药物浓度为5μg/ml。若筛选过程中，漂浮细胞大于60%，则停止筛选，换成正常培养基培养，至细胞密度约80%，可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5μg/ml嘌呤霉素时细胞正常增殖，可停止筛选，用不含药完全培养基正常培养。
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