总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)


  • 商品名称: 总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)
  • 产品货号: 02.13070-100
  • 品牌: EallBio/亿奥邦
  • 储存条件: -20℃避光保存
  • 有效期: 6个月

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抗氧化系列

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¥ 380

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¥ 380

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  • 产品描述
    • 商品名称: 总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)
    • 产品货号: 02.13070-100
    • 品牌: EallBio/亿奥邦
    • 储存条件: -20℃避光保存
    • 有效期: 6个月

    产品简介:

    总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法),即Total Antioxidant Capacity Assay Kit with FRAP method.简称T-AOC Assay Kit,是一种采用Ferric Reducing AbilityofPlasma(FRAP)方法,可以对血浆、血清、唾液、尿液等各种体液,细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液或各种抗氧化物(Antioxidant)溶液的总抗氧化能力进行检测的试剂盒。

    活性氧(Reactive oxygen species,ROS)主要包括羟基自由基、超氧自由基和过氧化氢。在细胞或组织的正常生理代谢过程中会产生活性氧,同时一些环境因子例如紫外照射、y射线照射、吸烟、环境污染等也可以诱导活性氧的产生。活性氧产生后,可以导致细胞内脂、蛋自和DNA等的氧化损伤,诱发氧化应激(Oxidative stress),继而导致各种肿瘤、动脉粥样硬化、风湿性关节炎、糖尿病肝损伤、以及中枢神经系统疾病等。

    机体中存在多种抗氧化物,包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等,可以清除体内产生的名种活性氧,以阻止活性氧诱导的氧化应激(Oxidativestress)的产生。一个体系内的各种抗氧化大分子抗氧化小分子和酶的总的水平即体现了该体系内的总抗氧化能力。因此测定血浆、血清、尿液、唾液等各种体液,细胞或组织等裂解液中的总抗氧化能力具有非常重要的生物学意义。

    植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力的检测可以用于检测各种溶液的抗氧化能力的强弱,可以用于筛选强抗氧化能力的药物。本试剂盒方便快捷,加入待测样品后3-5分钟即可进行吸光度测定,通常10-20个样品可以在十多分钟内检测完毕。

    FRAP法测定总抗氧化能力的原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric-tripyridyltriazine(Fe3*-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ,随后在593 nm测定蓝色的Fe2--TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。由于反应在酸性条件下进行,可以抑制内源性的一些干扰因素。并且由于血浆等样品中的铁离子或亚铁离子的总浓度通常低于10μM,因此血浆等样品中的铁离子或亚铁离子不会显著干扰FRAP法的检测反应。由于反应体系中的铁离子或亚铁离子是和TPTZ整合的,样品本身含有的少量金属离子螯合剂通常也不会显著影响检测反应。

    溶液配制:

    1.FRAP工作液配制:临用前根据试验所需量按试剂一:试剂二:试剂三工作液(V:V:V)=10:1:1的比例配成FRAP工作液,37℃C孵育避光保存,1-2小时内使用完毕。

    2.标准品配制:称取27.8mg本试剂盒提供的试剂四,用蒸馏水或样品配制溶液溶解并定容到1ml此时浓度即为100 mM。取适量100mM溶液稀释至0.15、0.3、0.6、0.9、1.2和1.5 mM。

    3.试剂五工作液配制:粉剂置于试剂瓶内玻璃瓶中,临用前加入1ml蒸馏水,充分振荡溶解;配成2 mg/ml工作液,用于阳性对照。2-8°C可保存两周。

    操作步骤:

    一、测定步骤

    1.酶标仪预热30 min以上,调节波长至590nm。

    2.阳性对照的准备:若需要线性关系,建议将2mg/ml的试剂五工作液用蒸馏水配制成2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625 mg/ml的工作液待用。

    3.FRAP工作液配制方法:临用前根据试验所需量按试剂一:试剂二:试剂三工作液 (V:V:V)=10:1;1的比例配成FRAP工作液,37℃C孵育避光保存,1-2小时内使用完毕。

    4.操作表:在96孔板或EP管中分别加入下列试剂:

    试剂名称(μl)

    空白管 测定管 阳性对照管
    待测样品 - 5 -
    蒸馏水 5 -  
    试剂五工作液 - - 5
    FRAP工作液 180 180 180

    充分混匀,37℃℃避光静置3-5min。测定590nm处的吸光度。

    注意事项:

    1.在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂会对本试剂盒的检测产生干扰,需尽量避免。

    2.如果样品中含有外加的较高浓度的铁盐或亚铁盐,会干扰测定。但血浆、血清、细胞或组织裂解液等样品中含有的微量的铁盐或亚铁盐不会干扰测定。

    3.样品中不能添加DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的物质,也不宜添加Tween、Triton和NP-40等去垢剂。

    4.测定时需可以测定A593的酶标仪一台(测585-605nm也可以)或可以测定微量样品的分光光度计一台。

    5.TPTZ对人体有刺激性,操作时请小心,并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。

    6.本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

    7.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    附录(仅供参考):

    标准曲线制作:在室温条件下按说明书操作,对系列标准品进行吸光度的测定,横坐标为度,纵坐标为吸光度,其数值及标曲如下

    标准品浓度(mmol/ml) 1.5 1.2 0.9 0.6 0.3 0.15
    吸光度 0.639 0.555 0.408 0.296 0.205 0.142

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