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产品描述
一、细胞介绍
293细胞株插入SV40T-抗原的温度敏感基因后产生的高转染效率的衍生株称为293T。
293T-GFP细胞，是在293T细胞的基础上，通过慢病毒感染的方式携带GFP基因，构建的绿色荧光示踪细胞。
二、细胞培养条件及特性
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细胞英文名称 |
293T-GFP |
细胞中文名称 |
人胚肾细胞绿色荧光标记 |
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来源 |
胚胎肾 |
含量 |
>1x106 细胞数 |
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形态特性 |
上皮细胞样 |
生长特性 |
贴壁生长，贴壁能力较弱 |
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规格 |
T25瓶或者1mL冻存管包装 |
冻存条件 |
无蛋白细胞冻存2.0 |
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培养体系 |
DMEM + 10%FBS + 1%P/S |
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传代方法 |
首次1:2，1:2-1:3 |
消化时间 |
1 min |
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备注 |
仅供科研使用 |
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三、细胞培养
- 该细胞为疏松贴壁生长，在运输过程中发生细胞脱落，这是正常现象，传代换液时请轻柔操作。
- 如收到货后，发现大片细胞聚团脱落，将培养瓶内所有培养基离心收集，1000rpm离心5min，弃去上清。沉淀加入1-2 mL胰酶轻轻吹打消化约1分钟，加入3-6 mL完全培养基终止消化，1000rpm离心5min，弃去上清。用1-2mL完全培养基吹匀，接种至2个含5-6mL完全培养基的T25培养瓶中培养，第二天给细胞换液。
四、细胞筛选
该细胞为稳定转染GFP的细胞，随细胞传代次数的增加，其GFP荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。
建议收到细胞后至少传3代，冻存留种后再进行筛选。
初次进行细胞筛选时，建议加入终浓度为0.5μg/mL嘌呤霉素的完全培养基维持培养，若无细胞漂浮或者漂浮较少，即可更换为含1μg/mL嘌呤霉素的完全培养基继续筛选，以此类推，至最高药物浓度为5μg/mL。若筛选过程中，漂浮细胞大于60%，则停止筛选，换成正常培养基培养，至细胞密度约80%，可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5μg/mL嘌呤霉素时细胞正常增殖，可停止筛选，用不含药完全培养基正常培养。